实验原理
利用低浓度去垢剂选择性裂解细胞膜，同时保持核膜完整，然后通过差速离心进行分离。
1.选择性裂解：
使用含有低浓度非离子去垢剂的等渗缓冲液。这种浓度足以溶解细胞膜和胞浆膜结构，但无法破坏结构更坚固的核膜。
2.差速离心：
通过控制离心力，可以初步将细胞核（沉淀）与胞浆成分（上清）分离开。
1）低速离心：完整的细胞核是细胞中最大最重的细胞器，在较低转速下（500-1,000g）即可沉淀。
2）高速离心：胞浆蛋白、细胞器（线粒体、微粒体等）需要更高的转速（10,000g以上）才能沉淀。
操作步骤
第一步：细胞收集与洗涤：
1）吸弃培养皿中的培养基；
2）用预冷的PBS轻柔地洗涤细胞2次，彻底洗去残留的血清（血清中含蛋白酶）；
3）彻底吸尽PBS。
Tip：使用胰酶处理贴壁细胞时要严格注意消化时间；胰酶会使细胞变得很脆弱，影响后续核质分离；不同细胞种类其核质分离结果略有所不同。
图片中左侧为细胞数量是2×106个数的CHO-S细胞（黄色细胞沉淀）；图片右侧为细胞数量1×105个数的Raw（白色细胞沉淀），作为反面对照，细胞个头较小，数量太少，对后续提出的蛋白浓度以及核浆分离结果有较大的影响。
第二步：细胞裂解：
1）加入一定量的裂解液裂解细胞；
2）涡旋振荡10-15秒（或剧烈吹打），以充分裂解细胞。此时应观察到液体变得非常粘稠（因DNA释放）；
3）冰上孵育10-15分钟。此时，细胞会因裂解而变得粘稠，透亮。
Tip：2×106个细胞体积通常为20μL，需要使用细胞计数仪检测密度后，再取2×106个细胞进行后续实验。
第三步：离心分离：
1）在4°C, 1000g离心5-10分钟；
2）离心后，溶液分为两层：
A.上面一层是上清(Supernatant)：即为胞浆蛋白提取物；小心将其转移到一个新的预冷离心管中，二次离心，确保细胞浆蛋白的干净无污染。
B.下面的沉淀(Pellet)：包含完整的细胞核以及未破碎的完整细胞、细胞骨架等，等待后续细胞核蛋白的裂解。
第四步：洗涤细胞核（关键纯化步骤）：
1）向沉淀中加入适量预冷的细胞浆裂解缓冲液；用移液器非常轻柔地重悬沉淀；
2）再次在4°C,1000 g离心5分钟；
3）小心吸弃上清；此时得到的沉淀是较纯的细胞核。
Tip：吸头切勿触及细胞沉淀，为降低胞浆组分对细胞核组分的污染，可以在沉淀上方保留极小体积的上清，换用10 μL的吸头尽可能吸尽，必要时可将极小体积上清弃掉。
第五步：核蛋白提取
1）向洗净的细胞核沉淀中加入适量的预冷细胞核裂解缓冲液；
2）在4°C下，通过涡旋或轻柔吹打重悬沉淀，并在摇床上孵育40分钟，使核膜裂解，核蛋白充分释放；
3）在4°C 13000g 离心10分钟。小心吸取上清，即为核蛋白提取物；将胞浆蛋白和核蛋白分装后，于-80°C保存。
Tip：为保证提取的核蛋白干净无污染，吸取时，可以在沉淀上方弃掉小部分上清。
提取蛋白时，出现的相关问题
1、核质分离不彻底，出现交叉污染：
2、核蛋白提取效率低：
3、其他问题：
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