Smart-RIP™ RIP kit (RNA结合蛋白免疫沉淀试剂盒)-免疫学检测-试剂-生物在线
上海复名医疗科技有限公司
Smart-RIP™ RIP kit (RNA结合蛋白免疫沉淀试剂盒)

Smart-RIP™ RIP kit (RNA结合蛋白免疫沉淀试剂盒)

商家询价

产品名称： Smart-RIP™ RIP kit (RNA结合蛋白免疫沉淀试剂盒)

英文名称： Smart-RIP™ RIP kit

产品编号： RIP-1001

产品价格： 询价

产品产地：

品牌商标： Engibody

更新时间： 2024-10-08T13:41:02

使用范围： null

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品名：Smart-RIP™ RIP Kit，货号：RIP-1001，品牌：Engibody

NIH、麻省理工、哈佛、斯坦福等世界名校课题组青睐并长期采购的RIP试剂盒！

Smart-RIP™ 保姆级RIP试剂盒的5大优势
1、本试剂盒适用于贴壁细胞、悬浮细胞、动物组织、植物组织。 

2、本试剂盒包含适用于细胞浆RNA-RBP互作及细胞核RNA-RBP互作的RIP。 

3、本试剂盒适用于经典Native RIP及Crosslink 交联法RIP（针对特别脆弱的RNA-RBP互作）。 

4、本试剂盒适配下游实验（RT-PCR、RT-qPCR以及转录组NGS二代测序）。
 
5、本说明书是一本RIP实验的全面技术手册。同时包含了表观遗传学的基础知识和基本脉络，汇总了RNA与各种蛋白互作的详细信息。


保姆级RIP试剂盒   

一盒在手，RIP无忧！

 

第一部分：RIP背景简介及应用场景
RNA与蛋白质相互作用分析
95%的人类基因组实际上并不编码蛋白质，而是产生大量非编码RNA，这些RNA在生命的生长和发育中发挥着重要的调节作用，与艾滋病病毒/艾滋病、白血病、糖尿病等各种疾病密切相关，并参与干细胞发育和表观遗传学的调节。RNA-蛋白质复合物驱动几乎所有细胞过程中基因表达的转录后调节，包括剪接、核输出、mRNA稳定性和蛋白质翻译。因此，对转录后调控网络和机制的理解取决于确定这些过程中RNA结合的变化。
 
RNA与蛋白质相互作用的研究越来越受到科学家的关注，成为表观遗传学研究的热点。
 
目前RNA研究的国自然热点主要是mRNA、LncRNA、miRNA、circRNA。

RIP（RNA Binding Protein Immunoprecipitation Assay），RNA与结合蛋白免疫共沉淀实验，其原理是RNA-binding proteins (RBPs)蛋白与RNA复合物被RBP特异性抗体捕获，随后抗体-蛋白-RNA复合物被Protein A/G磁珠所富集，经过洗涤步骤，最后洗脱目的RNA，纯化得到的RNA，下游衔接常规标准PCR、荧光定量PCR或建库并进行高通量二代测序。是一种用于体内In Vivo检测RNA-binding proteins (RBPs)蛋白与RNA片段相互作用的技术。
 
1、RIP和RNA-EMSA、CLIP、RNA Pull-down，这四种研究RNA-蛋白互作技术的内在区别是什么？

  • RIP———RNA蛋白免疫沉淀技术是一种用于在细胞天然背景下In Vivo体内探测蛋白质-RNA 相互作用的技术。这种方法可以用于检测特定RBP蛋白与RNA的结合水平。

 

  • RNA-EMSA———RNA电泳凝胶迁移阻滞实验(Electrophoretic Mobility Shift Assay)，In Vitro体外通过RNA探针检测目的蛋白，反向验证了RIP。

 

  • RNA Pull-down———In Vitro体外通过RNA探针捕获目的蛋白或其他候选蛋白，获取蛋白后进行WB检测或MS质谱鉴定。

 

  • CLIP———这是近年来的新兴技术，紫外交联RNA-RBP免疫沉淀技术，分为HITS-CLIP(CLIP-Seq)、PAR-CLIP、iCLIP、miCLIP，可以确定RNA与蛋白结合具体位点的碱基序列。

 
2、RIP和RNA-EMSA的联合分析，相互验证
这是经典研究策略，RIP是体内In Vivo研究RNA和蛋白互作，RNA-EMSA是体外In Vitro进行RNA和蛋白互作的验证，互相印证。

第二部分：RIP技术原理和技术流程
 技术原理：

  • RIP（RNA Binding Protein Immunoprecipitation Assay），RNA与结合蛋白免疫共沉淀实验的基本原理是在活细胞状态下裂解细胞把细胞内的蛋白-RNA复合物释放出来，然后用所研究的目的蛋白抗体免疫沉淀蛋白质-RNA复合物，从而特异性地捕获富集目的蛋白结合的RNA，用于下游的RT-PCR分析和RNA-Sequence测序。
  • RIP-RT-qPCR用于检测通过蛋白特异性免疫沉淀富集得到的特定RNA的相对数量。RIP-Sequence能对蛋白-RNA相互作用进行全转录组范围内的扫描分析。

 
技术流程：

根据研究的靶标蛋白-RNA复合物的结合稳定性不同，采用2种略有不同的技术流程
1、Native型RIP​
2、Crosslink甲醛交联型RIP  



第五部分：磁珠法RIP试剂盒组分清单
（共计18个组分，均可单独购买）
 

编号 组分名称 数量 保存 注意事项
下列组分收到后需储存在 4 °C中，磁珠千万不要冷冻。
RIP-001 RIP级Protein A/G 磁珠
(核酸预包被，非特异性RNA结合极其低)		 1 mL +4 °C 不能冷冻
不能高速离心
RIP-002 磁珠洗涤液 15 mL +4 °C  
RIP-003 磁珠-抗体结合反应液 5 mL +4 °C  
RIP-004 10×交联终止剂 30 mL +4 °C 仅用于交联法RIP
RIP-005 RNA-Protein Extract Buffer 15 mL +4 °C  
RIP-006 RIP Wash Buffer 1 15 mL +4 °C  
RIP-007 RIP Wash Buffer 2 15 mL +4 °C  
RIP-008 RIP Wash Buffer 3 15 mL +4 °C  
RIP-009 RIP Wash Buffer 4 15 mL +4 °C  
RIP-010 RIP Elution Buffer 4 mL +4 °C 如有絮状物，使用前需要置室温恢复溶解
RIP-011 TCEP 286 mg +4 °C 使用前配制，工作终浓度为50 mM
下列组分收到后必须要储存在 -20 °C中
RIP-012 RNA沉淀增强物 100 µL -20 °C  
RIP-013 RIP专用盐溶液 1.5 mL -20 °C  
RIP-019 DNase I套装（内含反应buffer） 100 µL -20 °C  
RIP-020 RNase抑制剂 50 µL -20 °C  
RIP-021 蛋白酶K 100 µL -20 °C  
RIP-022 RIP级Normal Mouse IgG
阴性对照		 100 µL -20 °C  
RIP-023 RIP级Normal Rabbit IgG
阴性对照		 100 µL -20 °C  

 

RIP实验结果展示
 


 Smart-RIP™ RIP kit 保姆级RIP试剂盒详细介绍页面：
https://mp.weixin.qq.com/s?__biz=MzkzMTc0NDIxOQ==&mid=2247483980&idx=1&sn=1a2f5e6e556f3368a21c6ecb65f75e1e&chksm=c26712f8f5109beec464b8e5e2c38d04f9c7b6c538fe3f314478f7b2c65bb3ebd7fb942100f7&token=1548684014&lang=zh_CN#rd 

注意：本试剂盒仅用于科学研究，不用于临床诊断。